Agencia Estatal Boletín Oficial del Estado

EL DECRETO DE LA PRESIDENCIA DEL GOBIERNO NUMERO 2484/1967, DE 21 DE SEPTIEMBRE (<BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO> DE 17 DE OCTUBRE), QUE APRUEBA EL CODIGO ALIMENTARIO ESPAÑOL, PREVE QUE PUEDAN SER OBJETO DE REGLAMENTACIONES ESPECIALES LAS MATERIAS EN EL REGULADAS.

EL REAL DECRETO 667/1983, DE 2 DE MARZO (<BOLETIN OFICIAL DEL ESTADO> DEL 31), POR EL QUE SE APRUEBA LA REGLAMENTACION TECNICO-SANITARIA PARA LA ELABORACION Y VENTA DE ZUMOS DE FRUTAS Y OTROS VEGETALES Y DE SUS DERIVADOS, CONTEMPLA DIVERSOS PARAMETROS QUE HAN DE CUMPLIR LOS ZUMOS DE FRUTAS.

POR TODO LO ANTERIOR, ES NECESARIO ESTABLECER UNOS METODOS OFICIALES DE ANALISIS QUE GARANTICEN LA CUANTIFICACION DE LOS PARAMETROS ANTES MENCIONADOS.

EN SU VIRTUD, A PROPUESTA DE LOS MINISTROS DE ECONOMIA Y HACIENDA; DE INDUSTRIA Y ENERGIA; DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION, Y DE SANIDAD Y CONSUMO, PREVIO INFORME PRECEPTIVO DE LA COMISION INTERMINISTERIAL PARA LA ORDENACION ALIMENTARIA Y OIDOS LOS REPRESENTANTES DE LOS SECTORES AFECTADOS,

ESTE MINISTERIO DE RELACIONES CON LAS CORTES Y DE LA SECRETARIA DEL GOBIERNO, DISPONE:

PRIMERO. SE APRUEBAN COMO OFICIALES LOS METODOS DE ANALISIS PARA LOS ZUMOS DE FRUTAS Y OTROS VEGETALES Y SUS DERIVADOS QUE SE CITAN EN EL ANEXO I.

SEGUNDO. CUANDO NO EXISTAN METODOS OFICIALES PARA DETERMINADOS ANALISIS Y, HASTA TANTO LOS MISMOS NO SEAN PROPUESTOS POR EL ORGANO COMPETENTE Y PREVIAMENTE INFORMADOS POR LA COMISION INTERMINISTERIAL PARA LA ORDENACION ALIMENTARIA, PODRAN SER UTILIZADOS LOS APROBADOS POR LOS ORGANISMOS NACIONALES O INTERNACIONALES DE RECONOCIDA SOLVENCIA.

DISPOSICION DEROGATORIA

QUEDAN DEROGADAS LAS DISPOSICIONES DE IGUAL O INFERIOR RANGO QUE SE OPONGAN A LA PRESENTE ORDEN.

MADRID, 29 DE ENERO DE 1988.

ZAPATERO GOMEZ

EXCMOS. SRES.

MINISTROS DE ECONOMIA Y HACIENDA, DE INDUSTRIA Y ENERGIA, DE AGRICULTURA, PESCA Y ALIMENTACION Y DE SANIDAD Y CONSUMO.

ANEXO I

METODOS OFICIALES DE ANALISIS DE ZUMOS DE FRUTAS Y OTROS VEGETALES Y SUS DERIVADOS

INDICE

1.

PREPARACION DE LA MUESTRA.

2. DENSIDAD.

3. EXTRACTO SECO.

4. PH.

5.

ACIDEZ TOTAL.

6. ACIDO ISOCITRICO.

7. GRADOS BRIX.

8. AZUCARES.

9.

RELACION AZUCARES TOTALES/GRADOS BRIX.

10. ACIDO ASCORBICO.

11. NITROGENO TOTAL.

12. INDICE DE FORMOL.

13. CENIZAS.

14. FOSFORO.

15. POTASIO.

16.

ACIDO SORBICO.

17. ACIDO BENZOICO.

18 (A). ANHIDRIDO SULFUROSO.

1.

PREPARACION DE LA MUESTRA

1.1 PRINCIPIO. LAS OPERACIONES DESCRITAS A CONTINUACION, TIENEN POR FINALIDAD CONSEGUIR UNA MUESTRA PARA EL ANALISIS LO MAS HOMOGENEA POSIBLE. POR ELLO, TODA SIMPLIFICACION O TRATAMIENTO INSUFICIENTE EN ESTA OPERACION, PUEDE CONDUCIR A UNOS RESULTADOS QUE NO SEAN REPRESENTATIVOS.

1.2 MATERIAL Y APARATOS:

1.2.1 TRITURADORA ELECTRICA DEL MAXIMO GRADO DE FINURA.

1.2.2 BALANZA.

1.2.3 AGITADOR MAGNETICO.

1.3 PROCEDIMIENTO:

1.3.1 ZUMOS Y NECTARES: HOMOGENEIZAR EL PRODUCTO ANTES DE CADA TOMA DE MUESTRA. CONTINUAR COMO INDICA LA METODOLOGIA DE CADA DETERMINACION.

1.3.2 CREMOGENADOS: TOMAR APROXIMADAMENTE UNOS 400 GRAMOS DE CREMOGENADO Y DILUIR HASTA UN LITRO CON AGUA DESTILADA. MEZCLAR Y CONTINUAR COMO EN 1.3.1. LOS RESULTADOS SE REFERIRAN A 100 GRAMOS DE PRODUCTO, TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION.

1.3.3 PULPAS: TRITURAR Y OBTENER EL CREMOGENADO. CONTINUAR COMO EN 1.3.2. LOS RESULTADOS SE REFERIRAN A 100 GRAMOS DEL PRODUCTO, TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION.

1.3.4 CONCENTRADOS Y DESHIDRATADOS: TOMAR UNA CANTIDAD ADECUADA DE CONCENTRADO O DESHIDRATADO Y DILUIR A UN LITRO CON AGUA DESTILADA, DE TAL MANERA QUE LA DISOLUCION TENGA APROXIMADAMENTE 10 BRIX. EN CASO DE CONCENTRADOS DE TIPO PULPOSO (ALBARICOQUE, MELOCOTON, PERA, TOMATE, ETC) REALIZAR LA DILUCION A UNOS 4 BRIX. CONTINUAR CON LA METODOLOGIA ESPECIFICA DE CADA DETERMINACION. LOS RESULTADOS SE REFERIRAN A 100 GRAMOS DE PRODUCTO, TENIENDO EN CUENTA LA DILUCION EFECTUADA.

1.3.5 CONGELADOS: DESCONGELAR LA MUESTRA A TEMPERATURA AMBIENTE Y CONTINUAR SEGUN PROCEDA.

1.3.6 ZUMOS GASIFICADOS: CUANDO PROCEDA, ELIMINAR EL GAS CARBONICO, POR AGITACION A TEMPERATURA AMBIENTE Y VACIO PARCIAL.

2. DENSIDAD

2.1 PRINCIPIO. LA DENSIDAD (20 C/20 C) DEL LIQUIDO A ANALIZAR SE DETERMINA POR MEDIO DEL PICNOMETRO.

2.2 MATERIAL Y APARATOS:

2.2.1 ESTUFA.

2.2.2 DESECADOR.

2.2.3 BAÑO A 20 C.

2.2.4 BALANZA ANALITICA SENSIBLE A 0,1 MILIGRAMOS.

2.2.5 PICNOMETRO REISCHAUER DE 50 MILILITROS O SIMILAR.

EL PICNOMETRO REISCHAUER CONSISTE EN UN MATRAZ DE 50 MILILITROS DE CAPACIDAD, CERRADO CON UN CAPUCHON ESMERILADO PROVISTO DE UN CUELLO DE 6 CENTIMETROS DE LONGITUD Y 4 MILIMETROS DE DIAMETRO INTERIOR.

2.2.6 ERLENMEYER DE 500 MILILITROS.

2.2.7 EMBUDO DE 10 CENTIMETROS DE DIAMETRO.

2.2.8 TUBOS CAPILARES.

2.3 REACTIVOS:

2.3.1 MEZCLA CROMICA.

2.3.2 PAPEL DE FILTRO.

2.4 PROCEDIMIENTO. SI EL LIQUIDO A ANALIZAR CONTIENE UNA APRECIABLE CANTIDAD DE GAS CARBONICO, ELIMINAR COMPLETAMENTE ESTE AGITANDO FUERTEMENTE EN UN ERLENMEYER DURANTE EL TIEMPO NECESARIO.

2.4.1 DETERMINACION DEL PESO DEL PICNOMETRO VACIO:

LIMPIAR EL PICNOMETRO CON MEZCLA CROMICA CALIENTE Y ENJUAGAR CUIDADOSAMENTE CON AGUA DESTILADA. SECAR DURANTE TRES HORAS EN ESTUFA DE 105-108 C.

ENFRIAR EN EL DESECADOR HASTA LA TEMPERATURA AMBIENTE.

PESAR, CON PRECISION DE CUATRO CIFRAS DECIMALES.

2.4.2 DETERMINACION DEL PESO DEL PICNOMETRO LLENO DE AGUA:

LLENAR EL PICNOMETRO HASTA LA MARCA CON AGUA DESTILADA. TAPAR Y PONERLO EN UN BAÑO DE AGUA A 20 C DURANTE 20 MINUTOS.

ESTANDO LA TEMPERATURA EQUILIBRADA, ENRASAR EL PICNOMETRO (SIEMPRE SUMERGIDO EN EL BAÑO DE AGUA) CON LA AYUDA DE UN CAPILAR.

SECAR LA PARTE VACIA DEL CUELLO DEL PICNOMETRO CON PAPEL DE FILTRO.

COLOCAR EL TAPON, RETIRAR EL PICNOMETRO DEL BAÑO DE AGUA Y SECAR CUIDADOSAMENTE.

PESAR EL PICNOMETRO LLENO DE AGUA CON PRECISION DE CUATRO CIFRAS DECIMALES.

2.4.3 DETERMINACION DEL PESO DEL PICNOMETRO LLENO DE MUESTRA:

DESPUES DE VACIAR EL PICNOMETRO, LAVAR VARIAS VECES CON LA MUESTRA Y PROCEDER COMO EN 2.4.2 SUSTITUYENDO EL AGUA POR LA MUESTRA.

2.5 CALCULOS. CALCULAR LA DENSIDAD 20 C/20 C, APLICANDO LA SIGUIENTE FORMULA:

D = C-A / B-A

SIENDO:

A = PESO PICNOMETRO VACIO.

B = PESO PICNOMETRO LLENO DE AGUA HASTA ELENRASE.

C = PESO PICNOMETRO LLENO DE MUESTRA PARA ANALIZAR HASTA EL ENRASE.

LA DENSIDAD OBTENIDA DEBE EXPRESARSE CON UNA PRECISION DE CUATRO CIFRAS DECIMALES.

2.6 REFERENCIAS. FEDERATION INTERNATIONALE DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. METODO NUMERO 1, 1968.

3. EXTRACTO SECO

(SOLIDOS SOLUBLES)

3.1 PRINCIPIO. EL CONTENIDO EN SOLIDOS SOLUBLES EXPRESADOS EN G/L SE CALCULA A PARTIR DEL VALOR DE LA DENSIDAD, OBTENIDA SEGUN EL METODO OFICIAL NUMERO 2 Y UTILIZANDO LA TABLA I.

TABLA I

EXTRACTO SECO TOTAL (G/L)

(CUADRO OMITIDO)

3.2 MATERIAL Y APARATOS. COMO EN (2.2).

TABLA II

TABLA INTERPOLAR

(CUADRO OMITIDO)

METODO NUMERO 8. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS.

AÑO 1985.

4. PH

4.1 PRINCIPIO.

MEDIDA POTENCIOMETRICA A 20 C, PREVIA ELIMINACION DEL DIOXIDO DE CARBONO POR AGITACION EN FRIO Y CON VACIO PARCIAL.

4.2 MATERIAL Y APARATOS:

4.2.1 PH-METRO.

4.2.2 ELECTRODO/S PARA MEDIDA DE PH.

4.3 REACTIVOS:

4.3.1 SOLUCION TAMPON PH = 7; DISOLVER 3,522 G DE DIHIDROGENO FOSFATO DE POTASIO (KH 2 PO 4 ); 14,020 G DE MONOHIDROGENO FOSFATO DISODICO DODECAHIDRATO (NA 2 HPO 4 12H 2 O) Y LLEVAR A UN LITRO CON AGUA DESTILADA.

4.3.2 SOLUCION TAMPON PH = 4; DISOLVER 10,211 G DE FTALATO ACIDO DE POTASIO (KHC 6 H 4 O 4 ) (SECANDO UNA HORA A 105 C) EN UN LITRO DE AGUA DESTILADA A 20 C.

4.4 PROCEDIMIENTO. TOMAR UN VOLUMEN DE MUESTRA EXENTA DE DIOXIDO DE CARBONO Y DETERMINAR EL PH.

4.5 EXPRESION DE LOS RESULTADOS. EXPRESAR EL PH MEDIDO A 20 C CON UNO O DOS DECIMALES, SEGUN LA PRECISION DEL APARATO.

4.6 OBSERVACIONES:

4.6.1 ANTES DE CADA NUEVA MEDIDA, LIMPIAR LOS ELECTRODOS CON AGUA DESTILADA Y SECARLOS CON PAPEL DE FILTRO.

4.6.2 EL CALIBRADO SE HACE CON AYUDA DE LAS SOLUCIONES TAMPON SIGUIENDO LAS INDICACIONES ESPECIFICAS DEL APARATO.

4.6.3 PARA EL CALIBRADO, PUEDEN UTILIZARSE SOLUCIONES TAMPON COMERCIALES PERO, EN CUALQUIER CASO, LA SOLUCION DEBE SER RECIENTE. NO USAR UNA SOLUCION TAMPON QUE CONTENGA MOHOS O CUALQUIER CLASE DE SEDIMENTOS.

4.7 REFERENCIAS. METODO NUMERO 11. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1968.

5. ACIDEZ TOTAL

5.1 PRINCIPIO. VALORACION POTENCIOMETRICA CON UNA DISOLUCION ALCALINA HASTA PH = 8,1 DE LA ACIDEZ DEL ZUMO O DERIVADO, PREVIA ELIMINACION DEL DIOXIDO DE CARBONO.

5.2 MATERIAL Y APARATOS:

5.2.1 PHMETRO.

5.2.2 ELECTRODO/S PARA MEDIDA DE PH.

5.2.3 AGITADOR MAGNETICO.

5.2.4 MATERIAL DE VIDRIO DE USO NORMAL EN LABORATORIO.

5.3 REACTIVOS:

5.3.1 SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO 0,1 N.

5.4 PROCEDIMIENTO. TOMAR UN VOLUMEN DE MUESTRA EXENTA DE DIOXIDO DE CARBONO, PREPARADA COMO EN (1.3) EN UN VASO. VALORAR AGITANDO CON HIDROXIDO DE SODIO (5.3.1) HASTA PH = 8,1.

5.5 CALCULOS. LOS RESULTADOS SE EXPRESAN EN GRAMOS DE ACIDO CITRICO/100 ML DE MUESTRA, TENIENDO EN CUENTA EL FACTOR DE DILUCION:

G DE ACIDO CITRICO/100 ML = (6,4 . V1 . F . N) / V2

SIENDO:

V1 = VOLUMEN DE HIDROXIDO DE SODIO (NA0H)0,1 N UTILIZADOS EN LA VALORACION.

V 2 = VOLUMEN DE MUESTRA TOMADA.

F = FACTOR HIDROXIDO DE SODIO.

5.6 REFERENCIAS. METODO NUMERO 3. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1968.

6. ACIDO ISOCITRICO

6.1 PRINCIPIO. EL ACIDO ISOCITRICO SE SEPARA DE LOS ZUMOS O DERIVADOS CON CLORURO DE BARIO Y SE DETERMINA ENZIMATICAMENTE.

EN PRESENCIA DE LA ENZIMA ISOCITRATO DESHIDROGENASA (ICDH) EL ACIDO ISOCITRICO (D-ISOCITRATO) SE DESCARBOXILA OXIDATIVAMENTE A CETOGLUTARATO POR EL FOSFATO DEL DINUCLEOTIDO DE LA NICOTINAMIDA-ADENINA (NADP).

(FORMULA OMITIDA)

LA CANTIDAD DE NADPH FORMADA EN ESTA REACCION ES ESTEQUIOMETRICA CON LA CANTIDAD DE ISOCITRATO. EL INCREMENTO DE NADPH SE DETERMINA POR LA VARIACION DE LA ABSORBANCIA A 340 NM.

6.2 MATERIAL Y APARATOS:

6.2.1 CUBETAS DE CUARZO DE 1 CM DE PASO LUZ.

6.2.2 ESPECTROFOTOMETRO CAPAZ DE MEDIR A 340 NM EN EL ULTRAVIOLETA.

6.3 REACTIVOS:

6.3.1 CARBON ACTIVO.

6.3.2 SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO 4N.

6.3.3 ACIDO CLORHIDRICO 4N.

6.3.4 SOLUCION DE AMONIACO AL 25 POR 100 P/P, D = 0,91 G/ML.

6.3.5 ACETONA.

6.3.6 SOLUCION DE CLORURO DE BARIO: DISOLVER 30 G DE CLORURO DE BARIO DIHIDRATADO (BACL 2 H 2 O) EN AGUA DESTILADA Y ENRASAR A 100 ML.

6.3.7 SOLUCION DE SULFATO DE SODIO: DISOLVER 71 MG DE SULFATO DE SODIO (NA 2 SO 4 H 2 O) EN AGUA DESTILADA Y ENRASAR A 1 LITRO.

6.3.8 SOLUCION DE SULFATO DE MANGANESO: DISOLVER 125 MG DE SULFATO DE MANGANESO (MN SO 4 H 2 O) EN 10 ML DE AGUA DESTILADA. LA SOLUCION ES ESTABLE SEIS MESES A TEMPERATURA AMBIENTE.

6.3.9 SOLUCION TAMPON PH = 7,0: DISOLVER 2,42 G DE TRIS (HIDROXIMETIL) AMINOMETANO Y 35 MG DE EDTA-NA 2 2H 2 O EN 80 ML DE AGUA DESTILADA, ACIDIFICAR HASA PH = 7, CON ACIDO CLORHIDRICO (6.3.3) Y ENRASAR CON AGUA HASTA 100 ML. ESTA SOLUCION ES ESTABLE POR LO MENOS UN AÑO A +4 C.

6.3.10 SOLUCION TAMPON PH = 7,4: DISOLVER 2,42 G DE TRIS (HIDROXIMETIL) AMINOMETANO Y 35 MG ETDA-NA 2 2H 2 O CON 80 ML DE AGUA DESTILADA. ACIDIFICAR HASTA PH = 7,4 CON ACIDO CLORHIDRICO (6.3.3) Y ENRASAR A 100 ML. ESTA SOLUCION ES ESTABLE POR LO MENOS UN AÑO A +4 C.

6.3.11 SOLUCION NADP: DISOLVER 50 MILIGRAMOS B NICOTINAMIDA-ADENINA-DINUCLEOTIDO FOSFATO DISODICO (B NADP-NA 2 ) EN 5 MILILITROS DE AGUA BIDESTILADA. ESTA SOLUCION ES ESTABLE POR LO MENOS CUATRO SEMANAS A +4 C.

6.3.12 SOLUCION ENZIMA (ICDH): DISOLVER 10 MG DE LIOFILIZADO EN 1 ML DE SOLUCION DE GLICERINA (50 POR 100 V/V CON AGUA DESTILADA). ESTA SOLUCION ES ESTABLE DURANTE CUATRO SEMANAS A +4 C.

6.4 PROCEDIMIENTO:

6.4.1 PREPARACION DE LA MUESTRA:

TRATAR 10 ML DE MUESTRA CON 5 ML DE HIDROXIDO DE SODIO (6.3.2) EN UN TUBO DE CENTRIFUGA DE 100 ML Y DEJAR REPOSAR DURANTE 10 MINUTOS A TEMPERATURA AMBIENTE (20C).

ADICIONAR 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO (6.3.3) Y DILUIR LA SOLUCION HASTA 25 ML. AÑADIR 2 ML DE SOLUCION DE AMONIACO (6.3.4), 3 ML DE CLORURO DE BARIO (6.3.6) Y 20 ML DE ACETONA (6.3.5). MEZCLAR PERFECTAMENTE CON UNA VARILLA DE VIDRIO. CENTRIFUGAR 5 MINUTOS A 3.000 REVOLUCIONES POR MINUTO. DECANTAR EL SOBRENADANTE CON CUIDADO Y ADICIONAR 20 ML DE SOLUCION DE SULFATO DE SODIO (6.3.7) AL PRECIPITADO EN EL TUBO DE CENTRIFUGA Y AGITAR CON VARILLA DE VIDRIO. DISOLVER EL PRECIPITADO EN BAÑO DE AGUA HIRVIENTE AGITANDO FRECUENTEMENTE DURANTE 10 MINUTOS; ENFRIAR Y TRANSFERIR CUANTITATIVAMENTE A UN MATRAZ AFORADO DE 50 ML ENRASANDO CON SOLUCION TAMPON PH = 7 (6.3.9). TRANSFERIR EL CONTENIDO DEL MATRAZ A OTRO CONTENIENDO 1 G DE CARBON ACTIVO (6.3.1), DEJAR REPOSAR 5 MINUTOS Y FILTRAR. EL LIQUIDO FILTRADO INCOLORO Y TRANSPARENTE SE USA PARA LA DETERMINACION DEL ACIDO ISOCITRICO EN LA MUESTRA.

6.4.2 DETERMINACION:

LA DETERMINACION SE REALIZA A UNA TEMPERATURA APROXIMADA DE 20 C. LA ABSORCION MAXIMA DE NADPH ES A 340 NM.

PONER EN LAS CUBETAS / BLANCO (ML) / MUESTRA (ML) TAMPON PH = 7,4 (6.3.10) 3,00 2,00

SULFATO DE MANGANESO (6.3.8) 0,10 0,10

SOLUCION NADP (6.3.11) 0,10 0,10

MUESTRA 1,00

MEZCLAR, ESPERAR 3 MINUTOS Y LEER LAS ABSORBANCIAS (A 1 , TANTO DEL BLANCO COMO DE LA MUESTRA FRENTE A AIRE.

EMPEZAR LA REACCION AÑADIENDO:

SOLUCION ENZIMA ICDH (6.3.12) 0,01 0,01

MEZCLAR Y ESPERAR A QUE LA REACCION SE DETENGA (4-10 MINUTOS); LEER LAS ABSORBANCIAS (A 2 ). CONTINUAR LEYENDO LAS ABSORBANCIAS A INTERVALOS DE 2 MINUTOS HASTA QUE SE INCREMENTE DE FORMA CONSTANTE LA LECTURA DE ABSORBANCIA. TOMAR COMO (A 2 ) EL PRIMER VALOR DE ABSORBANCIA A PARTIR DEL CUAL SE HAN OBSERVADO INCREMENTOS CONSTANTES.

6.5 CALCULOS:

(FORMULA OMITIDA)

EL CALCULO DE LA CONCENTRACION DE ACIDO ISOCITRICO EN FUNCION DE E SIGUE LA LEY DE LAMBERT-BEER. POR TANTO EL CONTENIDO EN MG/L DE ACIDO ISOCITRICO VENDRA DADO POR LA EXPRESION:

(FORMULA OMITIDA)

6.6 REFERENCIAS: METODO NUMERO 54 FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1984.

7. GRADO BRIX

7.1 PRINCIPIO. MEDIDA DEL INDICE DE REFRACCION Y CONVERSION EN GRADOS BRIX MEDIANTE LAS TABLAS ADJUNTAS.

7.2 MATERIAL Y APARATOS:

7.2.1 REFRACTOMETRO PROVISTO DEL EQUIPO NECESARIO PARA MANTENER LA TEMPERATURA A 20 C.

7.2.2 MATRACES O RECIPIENTES DE VIDRIO QUE CIERREN HERMETICAMENTE.

7.3 PROCEDIMIENTO:

COLOCAR EL REFRACTOMETRO EN UN LUGAR ILUMINADO CON LUZ DIFUSA.

CIRCULAR AGUA A TEMPERATURA CONSTANTE PREFERIBLEMENTE A 20 C A TRAVES DE LOS PRISMAS DEL REFRACTOMETRO.

CALIBRAR EL REFRACTOMETRO CON H 2 O DESTILADA A 20 C, CUYO INDICE DE REFRACCION TEORICO A DICHA TEMPERATURA ES 1,3330.

SITUAR LA MUESTRA EN UN ENVASE HERMETICAMENTE CERRADO EN UN BAÑO A 20 C Y ESPERAR A QUE ALCANCE DICHA TEMPERATURA. MEDIR EL INDICE DE REFRACCION.

7.4 CALCULOS. A PARTIR DEL VALOR OBTENIDO DEL INDICE DE REFRACCION SE DETERMINAN LOS GRADOS BRIX MEDIANTE LA TABLA I.

EXPRESAR LOS RESULTADOS CON UNA CIFRA DECIMAL.

7.5 OBSERVACIONES. SI SE EMPLEA OTRA TEMPERATURA PARA MEDIR EL INDICE DE REFRACCION, CORREGIR LOS GRADOS BRIX UTILIZANDO LA TABLA II.

7.6 REFERENCIAS:

7.6.1 METODO NUMERO 8. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1962.

7.6.2 METHODS ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. REFERENCE TABLES. AÑO 1984.

TABLA I

(CUADRO OMITIDO)

TABLA II

(CUADRO OMITIDO)

8. AZUCARES

8.1 PRINCIPIO. ELIMINACION PREVIA DE TODAS LAS MATERIAS REDUCTORAS DISTINTAS DE LOS AZUCARES, POR DEFECACION Y POSTERIOR VALORACION BASADA EN LA ACCION REDUCTORA DE LOS AZUCARES SOBRE UNA SOLUCION CUPRO-ALCALINA. PARA LA DETERMINACION DE AZUCARES NO REDUCTORES ES NECESARIO PROCEDER A UNA HIDROLISIS PREVIA.

8.2 MATERIAL Y APARATOS.

8.2.1 MATERIAL NECESARIO PARA VOLUMETRIAS.

8.2.2 BAÑO DE AGUA.

8.2.3 ERLENMEYER DE 300 ML CON REFRIGERANTE DE REFLUJO.

8.3 REACTIVOS.

8.3.1 SOLUCION DE ACIDO SULFURICO DEL 25 POR 100 (6 N).

8.3.2 SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO DEL 32 POR 100, D = 1,16 G/ML.

8.3.3 SOLUCION DE HIDROXIDO DE POTASIO DEL 30 POR 100.

8.3.4 SOLUCION DE HIDROXIDO DE POTASIO DEL 0,5 POR 100.

8.3.5 SOLUCION DE IODURO DE POTASIO: DISOLVER 30 G DE KI EN 100 ML DE AGUA DESTILADA.

8.3.6 SOLUCION DE ALMIDON: DISOLVER 1 G DE ALMIDON EN 100 ML DE AGUA DESTILADA.

8.3.7 SOLUCION DE CARREZ I: DISOLVER 150 G DE HEXACIANOFERRATO (II) DE POTASIO TRIHIDRATO [K 4 FE(CN) 6 . 3H 2 O] EN UN LITRO DE AGUA.

8.3.8 SOLUCION CARREZ II: DISOLVER 300 G DE SULFATO DE CINC HEPTAHIDRATO (ZN SO 4 . 7H 2 O) EN UN LITRO DE AGUA.

8.3.9 SOLUCION DE LUFF-SCHOORL: DISOLVER 50 G DE ACIDO CITRICO C 6 H 8 O 7 H 2 O EN 500 ML DE AGUA Y 143,7 G DE CARBONATO DE SODIO ANHIDRO EN 350 ML DE AGUA TIBIA, CUANDO SE HAYA ENFRIADO, MEZCLAR CON CUIDADO AMBAS SOLUCIONES.

DISOLVER 25 G DE SULFATO DE BORE (II) PENTAHIDRATO (CU SO 4 . 5H 2 O) EN 100 ML DE AGUA. AÑADIR A LA SOLUCION ANTERIOR Y ENRASAR CON AGUA HASTA UN LITRO.

8.3.10 SOLUCION DE TIOSULFATO DE SODIO (NA 2 S 2 O 3 . 5H 2 O) 0,1 N (24,8 G/1).

8.3.11 SOLUCION DE FENOLFTALEINA: DISOLVER 0,1 G DE FENOLFTALEINA EN 100 ML DE ETANOL.

8.4 PROCEDIMIENTO.

8.4.1 PREPARACION DE LA MUESTRA: TOMAR UNA CANTIDAD CONVENIENTE DE MUESTRA (2-5 ML). DILUIR CON AGUA. AÑADIR 5 ML DE LA SOLUCION CARREZ I (8.3.7) Y 5 ML DE LA SOLUCION CARREZ II (8.3.8). MEZCLAR Y ENRASAR HASTA 250 ML CON AGUA. DEJAR REPOSAR Y FILTRAR.

8.4.2 DETERMINACION DE AZUCARES ANTES DE LA INVERSION.

AZUCARES REDUCTORES: TOMAR 25 ML DE LA MUESTRA FILTRADA (QUE NO CONTENGA MAS DE 50 MG DE AZUCARES) EN UN MATRAZ CON 25 ML DE LA SOLUCION DE LUFF-SCHOORL (8.3.9). AÑADIR UNAS PERLAS DE VIDRIO Y CONECTAR EL REFRIGERANTE DE REFLUJO. CALENTAR EL MATRAZ CON POTENTE LLAMA HASTA ALCANZAR EN DOS MINUTOS LA EBULLICION Y MANTENER ESTA DURANTE DIEZ MINUTOS EXACTAMENTE. ENFRIAR CON AGUA Y CUANDO EL MATRAZ ESTE FRIO, AÑADIR CON CUIDADO 10 ML DE IODURO DE POTASIO (8.3.5), 25 ML DE ACIDO SULFURICO (8.3.1) Y 2 ML DE SOLUCION DE ALMIDON (8.3.6). VALORAR CON TIOSULFATO DE SODIO (8.3.10) HASTA VIRAJE DEL INDICADOR. SI SE HUBIERAN EMPLEADO MENOS DE 5 ML DE LA VALORACION, REPETIR LA DETERMINACION UTILIZANDO UNA DILUCION DE LA MUESTRA MAS ADECUADA.

REALIZAR PARALELAMENTE UN ENSAYO EN BLANCO EMPLEANDO 25 ML DE AGUA DESTILADA:

D 1 NUMERO DE MILILITROS DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1N EMPLEADOS EN LA VALORACION DEL BLANCO.

D 2 NUMERO DE MILILITROS DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1N EMPLEADOS EN LA VALORACION DE LA MUESTRA.

8.4.3 DETERMINACION DE LOS AZUCARES DESPUES DE LA INVERSION:

AZUCARES TOTALES: EN UN MATRAZ DE 100 ML MEZCLAR 50 ML DE FILTRADO OBTENIDO EN (8.4.1) CON 5 ML DE ACIDO CLORHIDRICO (8.3.2) Y LLEVAR EL MATRAZ AL BAÑO DE AGUA A 70 C, DONDE LA MUESTRA ADQUIRIRA 67 C EN DOS O TRES MINUTOS. MANTENER LA MUESTRA ENTRE 67-70 C, CINCO MINUTOS. ENFRIAR A UNOS 20 C Y NEUTRALIZAR CON HIDROXIDO DE POTASIO (8.3.3) Y (8.3.4) UTILIZANDO FENOLFTALEINA (8.3.11) COMO INDICADOR.

ENRASAR A 100 ML CON AGUA Y CONTINUAR COMO EN (8.4.2). REALIZAR PARALELAMENTE UN ENSAYO EN BLANCO.

D 3 NUMERO DE MILILITROS DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1N EMPLEADOS EN LA VALORACION DEL BLANCO.

D 4 NUMERO DE MILILITROS DE TIOSULFATO DE SODIO 0,1N EMPLEADOS EN LA VALORACION DE LA MUESTRA.

8.5 CALCULOS. CON LOS VALORES D 5 Y D 6 Y DE LA TABLA I SE OBTIENEN LOS CONTENIDOS EN MG DE GLUCOSA (A) Y (B) (INTERPOLAR SI FUERA NECESARIO):

D 5 = D 1-D 2 ; DE LA TABLA I SE OBTIENE EL VALOR (A).

D 6 = D 3-D 4 ; DE LA TABLA I SE OBTIENE EL VALOR (B).

AZUCARES REDUCTORES EN G GLUCOSA/100 ML = A / V

AZUCARES TOTALES EN G GLUCOSA/100 ML = 2 (B/V)

SIENDO:

V = VOLUMEN DE MUESTRA

8.6 OBSERVACIONES. DETERMINAR EL FACTOR DE TIOSULFATO DE SODIO (8.3.10) Y TENERLO EN CUENTA AL CALCULAR D 1 , D 2 , D 3 , D 4

8.7 REFERENCIAS. METODO NUMERO 4. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1985.

TABLA I

PARA 25 ML DE REACTIVO DE LUFF-SCHOORL

(CUADRO OMITIDO)

9. RELACION AZUCARES TOTALES/GRADOS BRIX

9.1 PRINCIPIO. ESTIMACION DEL CONTENIDO DE AZUCARES TOTALES DEL ZUMO O DERIVADO FRENTE A SUS GRADOS BRIX.

9.2 MATERIAL Y APARATOS:

9.2.1 COMO EN 7.2 Y 8.2.

9.3 PROCEDIMIENTO. DIVIDIR EL CONTENIDO DE LOS AZUCARES TOTALES OBTENIDOS EN 8.5 ENTRE LOS GRADOS BRIX OBTENIDOS EN 7.4.

9.4 EXPRESION DE RESULTADOS. EXPRESAR LOS RESULTADOS CON DOS CIFRAS DECIMALES.

10. ACIDO ASCORBICO

10.1 PRINCIPIO. SEPARACION, IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DEL ACIDO ASCORBICO POR CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA EFICACIA DETECTANDOLO EN EL ULTRAVIOLETA A 268 NM.

10.2 MATERIAL Y APARATOS:

10.2.1 EQUIPO DE FILTRACION DE MUESTRA Y DISOLVENTE PARA ELIMINAR PARTICULAS SUPERIORES A 0,5 MM.

10.2.2 CROMATOGRAFO DE LIQUIDOS EQUIPADO CON DETECTOR DE ULTRAVIOLETA DE LONGITUD DE ONDA VARIABLE Y REGISTRADOR.

10.2.3 COLUMNA NH 2 LICHORSORB DE 250 X 4,6 MILIMETROS DE 10 MICRASM O SIMILAR.

10.3 REACTIVOS:

10.3.1 SOLUCION PATRON DE ACIDO ASCORBICO EN AGUA DESTILADA DE 300 MILIGRAMOS/LITRO PREPARADA EN EL DIA Y CONSERVADA EN MATRAZ COLOR TOPACIO.

10.3.2 SOLUCION A:

TAMPON FOSFATO, PH 3,5. DISOLUCION 0,005 M DE DIHIDROGENO FOSFATO DE POTASIO (KH 2 PO 4 ):

FILTRAR ESTA SOLUCION CON 10.2.1.

10.3.3 SOLUCION B:

ACETONITRILO PARA HPLC.

10.4 PROCEDIMIENTO:

10.4.1 CONDICIONES CROMATOGRAFICAS ORIENTATIVAS:

FASE MOVIL:

TAMPON FOSFATO/ACETONITRILO: 60 : 40 (V/V).

FLUJO: 1 MILILITRO/MINUTO.

10.4.2 CALIBRADO: INYECTAR EN EL CROMATOGRAFO ENTRE 10 Y 20 ML DE LA SOLUCION PATRON 10.3.1 Y CALCULAR EL FACTOR DE RESPUESTA:

C O

FACTOR DE RESPUESTA (F) =

A P

SIENDO:

C O = CONCENTRACION EN MILIGRAMOS/LITRO DE ACIDO ASCORBICO.

A P = AREA DEL PICO EN EL CROMATOGRAMA DE LA SOLUCION PATRON.

10.4.3 DETERMINACION: HOMOGENEIZAR. FILTRAR CON 10.2.1 E INYECTAR DE 10 A 20 ML EN EL CROMATOGRAFO.

10.5 CALCULOS. EL CONTENIDO DE ACIDO ASCORBICO EXPRESADO EN MILIGRAMOS/LITRO (SIN DECIMALES), SE OBTENDRA MEDIANTE LA SIGUIENTE FORMULA:

ACIDO ASCORBICO (MILIGRAMO/LITRO) = F X AC

SIENDO:

F = FACTOR DE RESPUESTA.

AC = AREA DEL PICO A. ASCORBICO EN LA MUESTRA.

10.6 OBSERVACIONES:

10.6.1 LA DETERMINACION DE ACIDO ASCORBICO SE REALIZARA INMEDIATAMENTE DESPUES DE LA APERTURA DEL ENVASE.

10.6.2 CON ESTE METODO NO SE DETERMINA ACIDO DEHIDROASCORBICO.

10.6.3 EN ALGUNOS CASOS ES NECESARIA LA CENTRIFUGACION PREVIA DE LA MUESTRA.

11. NITROGENO TOTAL

11.1 PRINCIPIO. DIGESTION DEL PRODUCTO CON ACIDO SULFURICO CONCENTRADO, EN PRESENCIA DE CATALIZADOR, EN LA CUAL SE TRANSFORMA EL NITROGENO ORGANICO EN IONES AMONIO QUE, EN MEDIO FUERTEMENTE BASICO, ES DESPLAZADO EN FORMA DE AMONIACO Y RECOGIDO SOBRE ACIDO BORICO. LA POSTERIOR VALORACION CON ACIDO CLORHIDRICO PERMITE EL CALCULO DE LA CANTIDAD INICIALMENTE PRESENTE DE NITROGENO ORGANICO Y AMONIACAL EN LA MUESTRA.

11.2 MATERIAL Y APARATOS:

11.2.1 APARATO KJELDAHL O SIMILAR.

11.3 REACTIVOS:

11.3.1 ACIDO SULFURICO CONCENTRADO 96 POR 100 D = 1,84 GRAMOS/MILILITROS.

11.3.2 MEZCLA CATALIZADORA: 100 GRAMOS H 2 SO 4 ; 10 GRAMOS CU 2 SO 4 . 5H 2 O Y 1 GRAMO DE SELENIO EN POLVO.

11.3.3 SOLUCION DE HIDROXIDO SODICO AL 40 POR 100 P/V.

11.3.4 SOLUCION DE ACIDO BORICO AL 4 POR 100 P/V.

11.3.5 SOLUCION DE ACIDO CLORHIDRICO 0,05 N.

11.3.6 INDICADOR: PESAR 105 MILIGRAMOS DE ROJO DE METILO Y 150 MILIGRAMOS DE VERDE DE BROMOCRESOL Y DISOLVER A 100 MILILITROS CON ETANOL.

11.4 PROCEDIMIENTO:

PONER EN UN MATRAZ KJELDHAL UNA CANTIDAD ADECUADA DE MUESTRA (5-10 MILILITROS) E INTRODUCIR SUCESIVAMENTE 20 MILILITROS DE H 2 SO 4 CONCENTRADO (11.3.1) Y 6 GRAMOS DE CATALIZADOR (11.3.2). MEZCLAR SUAVEMENTE POR ROTACION Y COLOCAR EL MATRAZ EN BATERIA CALEFACTORA PONIENDO UN EMBUDO ADECUADO EN LA BOCA. CALENTAR SUAVEMENTE AL PRINCIPIO Y CUANDO EL CONJUNTO COMIENZA A DECOLORARSE, AUMENTAR LA INTENSIDAD DE LA CALEFACCION. MANTENER ESTA HASTA DECOLORACION COMPLETA, PROLONGANDOLA DURANTE UNOS MINUTOS.

DEJAR ENFRIAR HASTA TEMPERATURA AMBIENTE Y AÑADIR AGUA, DISOLVIENDO POR ROTACION SUAVE EL SULFATO POTASICO CRISTALIZADO.

EN UN ERLENMEYER DE 100 MILILITROS, PONER 10 MILILITROS DE ACIDO BORICO AL 4 POR 100 (11.3.4) Y UNAS GOTAS DE INDICADOR (11.3.6). INTRODUCIR HASTA EL FONDO EN EL ERLENMEYER LA ALARGADERA DEL APARATO DE DESTILACION.

AGREGAR EN EL MATRAZ DE DESTILACION UNOS 30 MILILITROS DE NAOH 40 POR 100 (11.3.3) Y AGUA DESTILADA. CALENTAR HASA EBULLICION Y RECOGER EL DESTILADO HASTA ARRASTRE COMPLETO DEL AMONIACO DE LA MUESTRA.

RETIRAR EL ERLENMEYER, LAVAR LA ALARGADERA Y EL INTERIOR DEL REFRIGERANTE RECOGIENDO LAS AGUAS DE LAVADO SOBRE EL DESTILADO. VALORAR CON HC1 0,05 N (11.3.5) HASTA VIRAJE DEL INDICADOR. EFECTUAR SIMULTANEAMENTE UNA PRUEBA EN BLANCO.

11.5 CALCULO. EL RESULTADO SE EXPRESARA EN MILIGRAMOS DE NITROGENO/100 MILIGRAMOS.

MILIGRAMOS DE NITROGENO/100 MILIGRAMOS = (1401.(V1-V2) N.F) / V

SIENDO:

V1 = VOLUMEN, EN MILITROS, DE HCI GASTADOS EN LA VALORACION.

V2 = VOLUMEN, EN MILITROS, DE HCI GASTADOS EN EL ENSAYO EN BLANCO.

F = FACTOR DE HC1.

N = NORMALIDAD DEL HC1.

V = VOLUMEN DE LA MUESTRA, EN MILILITROS.

11.6 REFERENCIAS:

11.6.1 NORMA ISO. R 937.

11.6.2 METODO NUMERO 28. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1965.

12. INDICE DE FORMOL

12.1 PRINCIPIO. VALORACION DE LA ACIDEZ DE LOS COMPUESTOS FORMADOS POR LA REACCION DEL FORMALDEHIDO CON LOS A-AMINOACIDOS.

12.2 MATERIAL Y APARATOS:

12.2.1 PH-METRO.

12.2.2 ELECTRODO/S DE MEDIDA DE PH.

12.2.3 MATERIAL DE USO NORMAL EN LABORATORIO.

12.3 REACTIVOS:

12.3.1 SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO 0,1 N.

12.3.2 AGUA OXIGENADA AL 30 POR 100.

12.3.3 SOLUCION DEL FORMALDEHIDO. LLEVAR EL FORMALDEHIDO, DEL 35 POR 100, COMO MINIMO, A PH 8,1, MEDIANTE LA SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO (12.3.1), UTILIZANDO EL PH-METRO.

COMPROBAR CADA HORA.

12.4 PROCEDIMIENTO. PONER 25 MILILITROS DE MUESTRA EN UN VASO, NEUTRALIZAR CON HIDROXIDO DE SODIO (12.3.1) HSTA PH 8,1, UTILIZANDO EL PH-METRO. AÑADIR 10 MILILITROS DE LA SOLUCION DE FORMALDEHIDO (12.3.3) Y MEZCLAR. AL CABO DE UN MINUTO, EFECTUAR LA VALORACION POTENCIOMETRICA DE LA SOLUCION PROBLEMA CON LA SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO (12.3.1) HASTA PH 8,1.

SI SE HUBIERAN UTILIZADO MAS DE 20 MILILITROS DE LA SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO, DEBERA REALIZARSE DE NUEVO LA VALORACION EMPLEANDO 15 MILILITROS DE SOLUCION DE FORMALDEHIDO, EN LUGAR DE 10 MILILITROS.

SI LA MUESTRA CONTIENE DIOXIDO DE AZUFRE, AÑADIR ALGUNAS GOTAS DE AGUA OXIGENADA (12.3.2) ANTES DE LA NEUTRALIZACION.

12.5 CALCULOS. EL INDICE DE FORMOL DE LA MUESTRA ANALIZADA ES IGUAL A LA CANTIDAD DE SOLUCION ALCALINA UTILIZADA EN LA VALORACION, EXPRESADA EN MILILITROS DE HIDROXIDO DE SODIO 0,1 N (CON UNA CIFRA DECIMAL) Y QUE CORRESPONDEN A 100 MILILITROS DE MUESTRA:

I.F. = (V.F.100 / V')

SIENDO:

V = VOLUMEN DE HIDROXIDO DE SODIO 0,1 N EMPLEANDO EN LA DETERMINACION.

F = FACTOR DEL HIDROXIDO DE SODIO EMPLEADO.

V' = VOLUMEN DE MUESTRA EMPLEADO EN LA DETERMINACION.

12.6 OBSERVACIONES. EN ZUMO DE LIMON DILUIR 1/1 CON H 2 O DESTILADA ANTES DE EFECTUAR LA VALORACION.

12.7 REFERENCIAS. METODO NUMERO 30. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1984.

13. CENIZAS

13.1 PRINCIPIO. SE DENOMINAN CENIZAS DE UN ZUMO O DERIVADO, AL CONJUNTO DE LOS PRODUCTOS DE INCINERACION DEL RESIDUO OBTENIDO TRAS LA EVAPORACION DE LA MUESTRA, DE MANERA QUE SE PUEDAN OBTENER TODOS LOS CATIONES (EXCEPTO AMONIO) EN FORMA DE CARBONATOS Y OTRAS SALES MINERALES ANHIDRAS.

13.2 MATERIAL Y APARATOS:

13.2.1 CAPSULA DE PLATINO, CUARZO O SIMILAR DE UNOS 80 MILIMETROS DE DIAMETRO, CON FONDO PLANO.

13.2.2 BAÑO DE AGUA Y BAÑO DE ARENA.

13.2.3 HORNO O MUFLA ELECTRICA.

13.2.4 BALANZA ANALITICA CON SENSIBILIDAD DE 0,1 MILIGRAMO.

13.3 PROCEDIMIENTO. PONER UN VOLUMEN ADECUADO DE MUESTRA (25 MILILITROS) BIEN HOMOGENEIZADO EN CAPSULA TARADA. EVAPORAR CON PRECAUCION EN EL BAÑO DE AGUA. AÑADIR AL RESIDUO SECO UNAS GOTAS DE ACEITE DE OLIVA, CALENTAR LENTAMENTE EN EL BAÑO DE ARENA HASTA QUE LA MAYOR PARTE DE LA SUSTANCIA ORGANICA ESTE CARBONIZADA. INTRODUCIR LA CAPSULA EN EL HORNO O MUFLA A 525 C (APROXIMADAMENTE DE SEIS A OCHO HORAS).

EN CASO DE QUE LA CARBONIZACION NO FUESE COMPLETA, HUMEDECER LAS CENIZAS CON AGUA DESTILADA, EVAPORAR DE NUEVO Y CALCINAR. REPETIR ESTA OPERACION TANTAS VECES COMO SEA PRECISO HASTA LA OBTENCION DE CENIZAS BLANCAS.

ENFRIAR LA CAPSULA EN UN DESECADOR (UNOS TREINTA MINUTOS) Y PESAR.

13.4 CALCULOS. EL CONTENIDO EN CENIZAS EXPRESADO EN GRAMOS/100 MILILITROS VENDRA DADO POR LA SIGUIENTE FORMULA:

CENIZAS (G/100 ML MUESTRA) = (P2-P1) 100 / V

SIENDO:

P1 = PESO EN GRAMOS DE LA CAPSULA VACIA.ZAS (G/100 ML P2 = PESO EN GRAMOS DE LAS CENIZAS MAS LA CAPSULA.

V = VOLUMEN DE LA MUESTRA ENMILILITROS.

13.5 OBSERVACIONES. EN ALGUN CASO LAS CENIZAS PUEDEN PRESENTAR UNA LIGERA COLORACION, QUE ES ACEPTADA Y NO REQUIERE UN POSTERIOR TRATAMIENTO.

13.6 REFERENCIAS. METODO NUMERO 9. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS.

AÑO 1962.

14. FOSFORO

14.1 PRINCIPIO.

TRANSFORMACION DE LOS COMPUESTOS FOSFORADOS EN ORTOFOSFATOS Y POSTERIOR VALORACION ESPECTROFOTOMETRICA COMO FOSFOMOLIBDOVANADATO.

14.2 MATERIAL Y APARATOS:

14.2.1 ESPECTROFOTOMETRO O COLORIMETRO CAPAZ DE EFECTUAR LECTURAS A 400 NM.

14.2.2 BAÑO DE ARENA.

14.3 REACTIVOS:

14.3.1 ACIDO COLRHIDRICO 36% D = 1,18 G/ML.

14.3.2 ACIDO NITRICO 70% D = 1,42 G/ML.

14.3.3 SOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO: DISOLVER 20 GRAMOS DE MOLIBDATO AMONICO TETRAHIDRATO (NH 4 ) 6 MO 7 O 24 .4H 2 O EN 200 MILILITROS DE AGUA CALIENTE.

14.3.4 SOLUCION DE METAVANADATO AMONICO: DISOLVER 1 GRAMO DE METAVANADATO AMONICO (NH 4 )VO 3 EN 300 MILILITROS DE AGUA DESTILADA CALIENTE, ENFRIAR Y AÑADIR 140 MILILITROS DE ACIDO NITRI CO (14.3.2).

14.3.5 SOLUCION DE METAMOLIBDOVANADATO: VERTER LENTAMENTE Y AGITANDO LA SOLUCION DE MOLIBDATO AMONICO (14.3.3) SOBRE LA SOLUCION DE METAVANADATO AMONICO (14.3.4) Y ENRASAR CON AGUA DESTILADA, A 1 LITRO.

14.3.6 ACIDO SULFURICO CONCENTRADO 96% D = 1,84 G/ML.

14.3.7 SOLUCION PATRON DE FOSFATO: DISOLVER 4,3885 GRAMOS DE DIHIDROGENO FOSFATO DE POTASIO KH 2 PO 4 (PREVIAMENTE DESECADO DOS HORAS A 105 C) EN AGUA DESTILADA, AÑADIR 2 MILILITROS DE ACIDO SULFURICO (14.3.6) Y DILUIR A 1 LITRO (1 MILILITRO CONTIENE 1 MILIGRAMO DE P).

14.4 PROCEDIMIENTO:

14.4.1 PREPARACION DE LA MUESTRA:

DISOLVER LAS CENIZAS OBTENIDAS EN EL METODO NUMERO 13 EN 5 MILILITROS DE HCL (14.3.1) Y 2 MILILITROS DE HNO 3 (14.3.2). HERVIR SUAVEMENTE DURANTE QUINCE MINUTOS EN BAÑO DE ARENA. LLEVAR A UN MATRAZ DE 50 MILILITROS Y ENRASAR CON AGUA DESTILADA.

REALIZAR PARALELAMENTE UN ENSAYO EN BLANCO.

14.4.2 DESARROLLO DEL COLOR: TOMAR 5 MILILITROS DE LAS SOLUCIONES OBTENIDAS EN (14.4.1) EN UN MATRAZ AFORADO DE 50 MILILITROS. LLEVAR HASTA 10 MILILITROS CON AGUA DESTILADA. AÑADIR 10 MILILITROS DEL REACTIVO (14.3.5) Y ENRASAR A 50 MILILITROS CON AGUA DESTILADA. DESPUES DE TREINTA MINUTOS, LEER LAS ABSORBANCIAS A 400 NM.

14.4.3 CURVA PATRON: DILUIR 10 MILILITROS DE LA SOLUCION PATRON (14.3.7) EN 250 MILILITROS DE AGUA DESTILADA. (1 MILILITRO DE ESTA SOLUCION CONTIENE 40 MG DE P). TOMAR 0, 2, 3, 4, 5 Y 10 MILILITROS DE LA SOLUCION DE 40 MG/MILILITRO (CON UN CONTENIDO DE 0, 80, 120, 160, 200 Y 400 MG). CONTINUAR COMO EN (14.4.2) Y TRAZAR LA CURVA DE CALIBRADO.

14.5 CALCULOS. EL CONTENIDO EN P TOTAL EXPRESADO EN MILIGRAMOS DE P/100 MILILITROS DE MUESTRA, SE OBTIENE COMPARANDO LAS ABSORBANCIAS DE LA MUESTRA CON LA CURVA PATRON, TENIENDO EN CUENTA EL BLANCO Y EL FACTOR DE DILUCION.

A = MG DE P/100 ML = A / V

SIENDO:

A = MG DE P LEIDOS EN LA CURVA PATRON.

V = VOLUMEN DE LA MUESTRA EN MILILITROS.

14.6 REFERENCIAS. METODO NUMERO 50.

FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1983.

15. POTASIO

15.1 PRINCIPIO . EL POTASIO SE DETERMINA POR ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORCION ATOMICA O FOTOMETRIA DE LLAMA, PREVIA ADICION DE CLORURO DE LITIO, PARA EVITAR LA IONIZACION PARCIAL DE LOS METALES EN LA LLAMA.

15.2 MATERIAL Y APARATOS:

15.2.1 ESPECTROFOMETRO DE ABSORCION ATOMICA O FOTOMETRO DE LLAMA.

15.2.2 MATERIAL DE USO NORMAL EN LABORATORIO.

15.3 REACTIVOS:

15.3.1 SOLUCION DE POTASIO DE 1.000 MILIGRAMOS/LITRO: DISOLVER 1,907 GRAMOS DE CLORURO DE POTASIO (KCL), EN UN LITRO DE AGUA DESTILADA.

15.3.2 SOLUCION DE CLORURO DE LITIO: DISOLVER 37,3 GRAMOS DE CLORURO DE LITIO (LICL) EN 100 MILILITROS DE AGUA DESTILADA.

15.3.3 SOLUCIONES DE

POTASIO DE 0, 1, 2, 3, 5, 7 MILIGRAMOS/LITRO, PREPARADAS A PARTIR DE (15.3.1), PREVIA ADICION DE LA CANTIDAD NECESARIA DE CLORURO DE LITIO, PARA QUE EL LITIO SE ENCUENTRE EN UNA PROPORCION DE APROXIMADAMENTE 2.000 MILIGRAMOS/LITROS.

15.4 PROCEDIMIENTO .

CENTRIFUGAR UN VOLUMEN ADECUADO DE MUESTRA.

TOMAR 1 CC. DEL SOBRENADANTE Y EFECTUAR LA DILUCION CONVENIENTE CON AGUA DESTILADA (PREVIA ADICION DE LA CANTIDAD NECESARIA DE CLORURO DE LITIO PARA QUE EL LITIO SE ENCUENTRE EN UNA PROPORCION DE APROXIMADAMENTE 2.000 MILIGRAMOS/LITRO). LEER EN ABSORCION ATOMICA O FOTOMETRIA DE LLAMA A 766-770 MILIMETROS FRENTE A LAS SOLUCIONES DE REFERENCIA.

15.5 CALCULOS . EL CONTENIDO DE POTASIO SE CALCULA A PARTIR DEL VALOR OBTENIDO, POR COMPARACION CON LA CURVA PATRON, TENIENDO EN CUENTA LA DILUCION EFECTUADA.

LOS RESULTADOS SE EXPRESAN EN MILIGRAMOS DE POTASIO/100 MILILITROS DE MUESTRA.

15.6 OBSERVACIONES:

15.6.1 PUEDE UTILIZARSE UNA SOLUCION DE 40 GRAMOS/LITRO DE CLORURO DE CESIO EN LUGAR DE CLORURO DE LITIO, SIENDO EN ESTE CASO LA CONCENTRACION ADECUADA DE CLORURO DE CESIO EN LAS DISOLUCIONES DE LAS MUESTRAS Y PATRONES ENTRE 0,1 - 0,4 POR 100.

15.7 REFERENCIAS:

15.7.1 FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. METODO NUMERO 33. AÑO 1984.

15.7.2 METODOS ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. ED. 1984.

16. ACIDO SORBICO

16.1 PRINCIPIO . SEPARACION, IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DEL ACIDO SORBICO POR CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA EFICACIA DETECTANDOLO EN EL ULTRAVIOLETA A 230 NM.

16.2 MATERIAL Y APARATOS:

16.2.1 EQUIPOS DE FILTRACION DE MUESTRA Y DISOLVENTES, PARA ELIMINAR PARTICULAS SUPERIORES A 0,5 M M.

16.2.2 CROMATOGRAFO DE LIQUIDOS EQUIPADO CON DETECTOR DE ULTRAVIOLETA DE LONGITUD DE ONDA VARIABLE Y REGISTRADOR.

16.2.3 COLUMNA C-18 DE 250 X 4,6 MM DE 10 M M O SIMILAR.

16.2.4 BAÑO DE ULTRASONIDO.

16.3 REACTIVOS:

16.3.1 SOLUCION PATRON DE ACIDO SORBICO EN METANOL DE 50 MILIGRAMOS/LITRO.

16.3.2 SOLUCION TAMPON DE FOSFATOS DE PH = 6,6. DISOLVER 2,5 GRAMOS DE HIDROGENO FOSFATO DE POTASIO TRIHIDRATO (K 2 H PO 4 H 2 O) Y 2,5 GRAMOS DE DIHIDROGENO FOSFATO DE POTASIO (KH 2 PO 4 ), EN UN LITRO DE AGUA DESTILADA. FILTRAR ESTA SOLUCION CON (16.2.1).

16.3.3 METANOL PARA HPLC.

16.4 PROCEDIMIENTO:

16.4.1 CONDICIONES CROMATOGRAFICAS ORIENTATIVAS:

FASE MOVIL: METANOL-TAMPON FOSFATO 10 : 90 (V/V).

FLUJO: 1 MILILITRO/MINUTO.

16.4.2 CALIBRADO:

INYECTAR EN EL CROMATOGRAFO ENTRE 10 Y 20 M 1 DE LA SOLUCION PATRON (16.3.1), Y CALCULAR EL FACTOR DE RESPUESTA.

FACTOR DE RESPUESTA (F) =

C 0 / A P

SIENDO:

C 0 = CONCENTRACION, EN MILIGRAMOS/LITROS, DE ACIDO SORBICO.

A P = AREA DEL PICO EN EL CROMATOGRAMA DE LA SOLUCION PATRON.

16.4.3 DETERMINACION: TOMAR 10 MILILITROS DE ZUMO EN UN MATRAZ DE 50 MILILITROS Y ENRASAR CON METANOL. FILTRAR E INYECTAR DE 10 Y 20 M1 EN EL CROMATOGRAFO.

16.5 CALCULOS:

16.5.1 EL CONTENIDO EN ACIDO SORBICO EXPRESADO EN MILIGRAMOS/LITROS (SIN DECIMALES), SE OBTENDRA MEDIANTE LA SIGUIENTE FORMULA:

ACIDO SORBICO (MG/L) = F X A 1 X F

SIENDO:

F = FACTOR DE RESPUESTA.

A 1 = AREA DEL PICO DEL ACIDO SORBICO EN LA MUESTRA.

F = FACTOR DE DILUCION DE LA MUESTRA.

16.6 OBSERVACIONES . LA SENSIBILIDAD PUEDE AUMENTARSE EFECTUANDO LECTURAS A 250 NM.

16.7 REFERENCIAS . T. STIJVE AND HISCHENHUBER. DEUTSCHE LEBENSMITTEL-RUNDSCHAU/80, JAHRG/HEFT 3/1984.

17. ACIDO BENZOICO

17.1 PRINCIPIO. SEPARACION, IDENTIFICACION Y CUANTIFICACION DEL ACIDO BENZOICO POR CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE ALTA EFICACIA, DETECTANDOLO EN EL ULTRAVIOLETA A 230 NM.

17.2 MATERIAL Y APARATOS:

17.2.1 EQUIPOS DE FILTRACION DE MUESTRA Y DISOLVENTES, PARA ELIMINAR PARTICULAS SUPERIORES A 0,5 MM.

17.2.2 CROMATOGRAFO DE LIQUIDOS EQUIPADO CON DETECTOR DE ULTRAVIOLETA DE LONGITUD DE ONDA VARIABLE Y REGISTRADOR.

17.2.3 COLUMNA C 18 DE 250 X 4,6 MILIMETROS DE 10 MM O SIMILAR.

17.2.4 BAÑO DE ULTRASONIDO.

17.3 REACTIVOS:

17.3.1 SOLUCION PATRON DE ACIDO BENZOICO EN METANOL DE 50 MILIGRAMOS/LITRO.

17.3.2 SOLUCION TAMPON DE FOSFATO DE PH = 6,6. DISOLVER 2,5 GRAMOS DE HIDROGENO FOSFATO DE POTASIO TRIHIDRATO (K 2 HPO 4 H 2 O) Y 2,5 GRAMOS DE DIHIDROGENO FOSFATO DE POTASIO (KH 2 PO 4 ) EN UN LITRO DE AGUA. FILTRAR ESTA SOLUCION CON 17.2.1.

17.3.3 METANOL PARA HPLC.

17.4 PROCEDIMIENTO:

17.4.1 CONDICIONES CROMATOGRAFICAS ORIENTATIVAS:

FASE MOVIL: METANOL-TAMPON FOSFATO 10 : 90 (V/V).

FLUJO:

1 MILILITRO/MINUTO.

17.4.2 CALIBRADO: INYECTAR EN EL CROMATOGRAFO ENTRE 10 Y 20 ML DE LA SOLUCION PATRON 17.3.1 Y CALCULAR EL FACTOR DE RESPUESTA.

FACTOR DE RESPUESTA (F) = C O / A P

SIENDO:

CO = CONCENTRACION, EN MILIGRAMOS/LITRO, DE ACIDO BENZOICO.

AP = AREA DEL PICO EN EL CROMATOGRAMA DE LA SOLUCION PATRON.

17.4.3 DETERMINACION: TOMAR 10 MILILITROS DE ZUMO EN UN MATRAZ DE 50 MILILITROS Y ENRASAR CON METANOL. FILTRAR E INYECTAR DE 10 A 20 ML EN EL CROMATOGRAFO.

17.5 CALCULOS:

17.5.1 EL CONTENIDO EN ACIDO BENZOICO EXPRESADO EN MILIGRAMOS/LITRO (SIN DECIMALES) SE OBTENDRA MEDIANTE LA SIGUIENTE FORMULA:

ACIDO BENZOICO (MILIGRAMOS/LITRO) = F X A 1 X F

SIENDO:

F = FACTOR DE RESPUESTA.

A 1 = AREA DEL PICO DEL ACIDO BENZOICO EN LA MUESTRA.

F = FACTOR DE DILUCION DE LA MUESTRA.

17.6 OBSERVACIONES. LA SENSIBILIDAD PUEDE AUMENTARSE EFECTUANDO LECTURAS A 217 NM.

17.7 REFERENCIAS. T. STIJVE AND C. HISCHENHUBER. DEUTSCHE LEBENSMITTEL-RUDSCHAU/80, JAHRG/HEFT 3/1984.

18 (A). ANHIDRIDO SULFUROSO

(METODO PAUL)

18 (A).1 PRINCIPIO. LIBERACION DEL SULFUROSO LIBRE Y COMBINADO POR ACIDIFICACION Y POSTERIOR CALENTAMIENTO Y OXIDACION POR BORBOTEO EN AGUA OXIGENADA Y VALORACION CON SOSA DEL ACIDO SULFURICO FORMADO.

18 (A).2 MATERIAL Y APARATOS:

18 (A).2.1 APARATO LIEB-ZACHERL COMO SE INDICA EN LA FIGU RA 18 (A).

18 (A).2.2 MECHERO DE ALCOHOL O SIMILAR.

18 (A).2.3 TUBO BORBOTEADOR PROVISTO DE BOLA HUECA EN UN EXTREMO CON UNOS 20 ORIFICIOS DE 0,2 MILIMETROS DE DIAMETRO ALREDEDOR DEL CIRCULO MAXIMO HORIZONTAL.

18 (A).2.4 FRASCO CON AGUA Y TAPON ATRAVESADO POR EL TUBO QUE COMUNICA CON EL BORBOTEADOR PARA HACER VACIO, Y OTRO TUBO SUMERGIDO EN EL AGUA PARA ACUSAR LA INTENSIDAD DEL VACIO POR LA DEPRESION DE LA COLUMNA DE AGUA EN EL INTERIOR DEL TUBO, DEPRESION QUE DEBE MANTENERSE ENTRE 25-35 CENTIMETROS.

18 (A).2.5 MATRAZ DE 250 MILILITROS.

18 (A).2.6 REFRIGERANTE QUE CONDENSE VAPORES Y DEJE PASAR EL GAS EN RECORRIDO SEGURO.

18 (A).3 REACTIVOS:

18 (A).3.1 ACIDO FOSFORICO AL 25 POR 100 (P/V).

18 (A).3.2 AGUA OXIGENADA DE 0,3 POR 100.

18 (A).3.3 INDICADOR: 0,1 GRAMOS DE ROJO DE METILO Y 0,05 GRAMOS DE AZUL DE METILENO EN 100 MILILITROS DE ALCOHOL AL 50 POR 100.

18 (A).3.4 SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO 0,01 N.

18 (A).4 PROCEDIMIENTO:

SE TOMAN 100 MILILITROS DE MUESTRA EN EL MATRAZ DEL APARATO LIEB-ZACHERL. SE AÑADEN 20 MILILITROS DE ACIDO FOSFORICO [18 (A).3.1] CON EL MATRAZ YA UNIDO AL APARATO. EN EL MATRAZ RECEPTOR SE PONEN 2 O 3 MILILITROS DE AGUA OXIGENADA [18 (A).3.2]. SE NEUTRALIZA EXACTAMENTE CON HIDROXIDO DE SODIO [18 (A).3.4] DESPUES DE HABER AÑADIDO DOS GOTAS DE LA MEZCLA DE INDICADOR Y SE CONECTA AL APARATO.

SE ASPIRA AIRE A TRAVES DEL APARATO CON EBULLICION SUAVE DE LA MUESTRA DURANTE 15 MINUTOS. EL SO 2 LIBERADO SE RECOGE EN EL MATRAZ RECEPTOR TRANSFORMANDOSE EN SO 4 H 2 POR ACCION DEL AGUA OXIGENADA.

ESTE ACIDO SULFURICO SE VALORA CON SOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO (18 (A).3.4).

18 (A).5 CALCULOS:

MILIGRAMOS SO 2 / LITRO = 320 V 1 / V2

SIENDO:

V 1 = VOLUMEN, EN MILILITROS, DE NAOH N/100.

V 2 = VOLUMEN, EN MILILITROS, DE MUESTRA UTILIZADA.

18 (A).6 OBSERVACIONES:

A) EL CALENTAMIENTO DE LA SOLUCION DE LA MUESTRA SE HACE MEDIANTE UN MECHERO DE ALCOHOL CON LLAMA DE 4-5 CENTIMETROS DE ALTURA, SITUADA DE FORMA QUE EL MATRAZ SOLO SEA TOCADO POR EL EXTREMO DE LA LLAMA.

B) EL VACIO PRODUCIDO POR EL REGULADOR DE PRESION DEBERA ESTAR COMPRENDIDO ENTRE 25 Y 35 CENTIMETROS.

C) EL CONDENSADOR DE REFLUJO DEBERA ESTAR PROVISTO DE SUFICIENTE AGUA FRIA.

D) LA DISOLUCION DE HIDROXIDO DE SODIO UTILIZADA EN LA VALORACION DEBE PREPARARSE DIARIAMENTE.

E) ESTE METODO ES APLICABLE PARA CONTENIDOS, EN ANHIDRIDO SULFUROSO A PARTIR DE 10 MILIGRAMOS/LITRO.

18 (A).7 REFERENCIAS. METODO NUMERO 7. FEDERATION INTERNATIONAL DES PRODUCTEURS DE JUS DE FRUITS. AÑO 1968.